بدلاً من الألواح المطلية بطبقة رقيقة من المواد الماصة ، يمكن استخدام ورق كروماتوغرافي خاص على شكل صفائح أو شرائط. يجب أن يكون الورق الكروماتوغرافي نقيًا كيميائيًا ، محايدًا ، خاملًا فيما يتعلق بمكونات المحلول والطور المتحرك ، وأن يكون موحدًا في الكثافة ؛ تعتبر بنية جزيئات السليلوز في الورق ، واتجاه الألياف ، والخصائص الأخرى التي تؤثر على سرعة المرحلة المتحركة مهمة. يتم تنفيذ العمليات الرئيسية في الكروماتوغرافيا الورقية بنفس الطريقة التي يتم بها في كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة.
لفصل المواد القابلة للذوبان في الماء ، على سبيل المثال ، الأيونات غير العضوية ، عادةً ما يتم أخذ المذيب العضوي كمرحلة متحركة ، ويتم استخدام الماء كمرحلة ثابتة (يتم ترطيب الورق مسبقًا بالماء). لفصل المكونات شديدة الذوبان في المذيبات العضوية ، يتم تحويل الورق المحب للماء إلى ورق كاره للماء عن طريق تشريبه بمحلول من المواد العضوية (بارافين ، زيت نباتي ، إلخ) ، والماء ، محلول مائي لحمض أو قلوي ، محلول مائي يتم استخدام الحل كمرحلة متنقلة.
يجب عدم خلط مذيبات المرحلتين الثابتة والمتحركة ، ويجب ألا تتغير تركيبة المذيب أثناء الفصل الكروماتوجرافي ، كما يجب إزالة المذيبات بسهولة من الورق. نادرا ما تستخدم المذيبات الفردية. في كثير من الأحيان ، يتم استخدام مخاليط المواد لهذا الغرض ، على سبيل المثال ، كحول البوتيل أو الأميل مع كحول الميثيل أو الإيثيل ، ومخاليط كحول البوتيل مع حمض الأسيتيك ، والأمونيا ، إلخ.
وفقًا لتقنية التنفيذ ، يتم تمييز الأنواع التالية من الكروماتوغرافيا الورقية: أحادي البعد ، ثنائي الأبعاد ، دائري وكهربائي. للحصول على مخططات كروماتوجرافية ثنائية الأبعاد ، يتم إجراء الفصل الكروماتوجرافي مرتين: بعد معالجة العينة بمذيب واحد ، يتم تدوير مخطط الكروماتوجرام بزاوية 90 درجة وكروماتوجرافيا مرة ثانية بمذيب آخر. تسمح هذه التقنية بفصل أدق لمكونات الخليط. تقنية محددة هي الجمع بين HD والرحلان الكهربي. للقيام بذلك ، يتم تطبيق جهد كهربائي ثابت على ورقة مبللة من الورق الكروماتوغرافي. يؤدي الإجراء الإضافي للمجال الكهربائي إلى فصل أوضح ، خاصة للأيونات ذات الشحنات المختلفة. يمكن إجراء الفصل الكهربائي في وقت واحد مع الفصل اللوني ، وكذلك قبل أو بعد اللوني.
يمكن تحديد التركيب النوعي للعينة في طريقة كروماتوغرافيا توزيع الورق ، وكذلك في TLC ، إما من خلال اللون المحدد للبقع الفردية على مخطط الكروماتوغرام ، أو من خلال القيمة العددية ص Fكل مكون. يتم إجراء التحديدات الكمية في BC وفقًا للخصائص الكروماتوجرافية (حسب مساحة البقعة على الكروماتوجرام وشدة لونها) أو بعد الغسيل بطريقة فيزيائية كيميائية مناسبة. لاحظ أن طريقة الكروماتوغرافيا الورقية ، التي اقترحها مارتن وسينج عام 1941 ، تستخدم حاليًا نادرًا جدًا في المختبرات التحليلية.
أسئلة لضبط النفس
ما هي مزايا الكروماتوغرافيا ثنائية الأبعاد مقارنة بالكروماتوغرافيا الورقية أحادية الأبعاد أو TLC؟
كيفية التعرف على بقع المركبات العضوية في طريقة TLC؟
كيف يتم إجراء التحليل الكمي بطريقة TLC؟
كيفية تحديد ص F في طريقة BC و TLC؟ على ماذا تعتمد القيمة؟ ص Fوما هي الشروط التي يجب أن تبقى ثابتة أثناء التجربة؟
كيف يمكن تحديد تركيزات مكونات المخلوط بعد الفصل بواسطة BC أو TLC؟
كيف يتم إجراء التحليل النوعي باستخدام خيارات الكروماتوغرافيا المستوية - PC و TLC؟
ما هي الطرق التي يتم بها إدخال عينة من خليط المواد المحللة في التركيب الكروماتوغرافي في الكروماتوغرافيا الورقية؟
لماذا من الضروري إغلاق الحجرة بإحكام بالمذيب واللوحة في طريقة TLC أثناء صعود واجهة المذيب؟
كيف يتم الكشف عن المكونات وتحديدها في الورق والكروماتوجرام ذو الطبقة الرقيقة؟
ما هي تطبيقات ومزايا وعيوب كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة؟
العملية الكروماتوغرافية التي تحدث على ورقة من ورق الترشيح عند التحرك خلال الشعيرات الدموية وسطح الطور المتحرك ،
يسمى الكروماتوغرافيا الورقية.
المرحلة الثابتة هي إما الورق نفسه أو المواد
تطبق بشكل متغير على أليافها. يمكن أن تكون آلية الكروماتوغرافيا الورقية عبارة عن تقسيم أو امتزاز أو تبادل أيوني. يكرر-
تحدث حركة المرحلة المتحركة إما فقط تحت تأثير الشعيرات الدموية
القوى (اللوني الصاعد) ، أو تحت تأثير القوى الشعرية والجاذبية (اللوني التنازلي).
أثناء الفصل اللوني ، تتشكل المواد التي تم تحليلها على
البقع المستديرة أو البيضاوية بركه (مناطق). يُطلق على مجموع البقع التي تم الحصول عليها عن طريق الفصل الكروماتوغرافي لعينة معينة تم تحليلها اسم كروماتوغرافيا.
ماتوجرام.
يتميز تنقل المادة أثناء الفصل اللوني بـ
القيمة R f ، وهي نسبة المسافة من خط البداية إلى مركز بقعة التحليل إلى المسافة من خط البداية إلى الخط الأمامي للمرحلة المتنقلة (انظر دستور الأدوية العام "كروماتوغرافيا").
يتم تحديد أصالة التحليل في نفس الوقت
كروماتوغرافيا نوم على ورقة واحدة تم تحليلها واستنباط-
مادة هدية. إذا كانت العينات متطابقة ، فإن البقع المقابلة في كروماتوجرامس لها نفس المظهر وقيم R f متساوية. لتحديد الهوية
يُنصح أحيانًا باستخدام جهاز كروماتوجراف لخليط كميات متساوية من المواد التي تم تحليلها والقياسية. على الكروماتوجرام ، يجب أن تلاحظ
اعطاء مكان واحد. يجب اختيار شروط الكروماتوغرافيا بحيث
بحيث تختلف قيم R f عن 0 و 1.
عند اختبار النقاء ، يجب أن يكون للشوائب والمواد الأساسية قيم R f مختلفة. في الوقت نفسه ، يمكن للمرء أن يحكم على درجة نقاء التحليل-
من المادة التي يتم قياسها بحجم وشدة اللون (أو الامتصاص)
بقع الشوائب الموجودة على الكروماتوجرام. يمكن تحديد محتوى الشوائب بشكل شبه كمي. للقيام بذلك ، على ورقة واحدة-
gi في وقت واحد كروماتوجراف كمية معينة من التحليل
من مادتي وعدة عينات من النجاسة المحددة (الشاهد) ج
تركيزات مختلفة ومعروفة بدقة. يتم تقدير محتوى الشوائب في العينة التي تم تحليلها بمقارنة موضعها على الكروماتوجرام بمجموع مساحة البقعة وكثافة اللون (أو الامتصاص) مع
البقع الشاهدة. مع وجود تشابه كافٍ لبقع الشوائب في الشكل و
يسمح بالطلاء مع بقع من المادة الرئيسية ، تؤخذ بنفس الكمية
استخدام كميات مناسبة من المادة الرئيسية مثل
الشاهد.
للتحليل الكمي ، يتم استخدام مقياس الطيف الضوئي أو مقاييس كثافة الفيديو. لمعالجة كروماتوجرامس في المنطقة المرئية ، خاصة
يُنصح باستخدام الماسحات الضوئية المسطحة والبرامج ذات الصلة.
من الممكن أيضًا قياس المواد بعد استخلاصها من الكروماتوجرام. للقيام بذلك ، يتم قطع البقع واستخراجها
مادة قابلة للذوبان. يتم العثور على محتوى التحليل في المستخلص أو البقايا الجافة بعد تقطير المذيب بأي طريقة ،
مناسبة لتحديد التركيزات المنخفضة.
معدات
لإجراء الكروماتوغرافيا على ورق مختوم
غرف الاستحمام مصنوعة من مادة خاملة وتسمح
مراقبة تقدم عملية الفصل مع إغلاق غطاء الغرفة. في كثير من الأحيان ، تأتي أكواب أو أسطوانات زجاجية مع
غطاء مصبوب ومختوم بالإضافة إلى ذلك. قد يحتوي الغطاء على مداخل (بوابات) لإضافة مذيب أو تخفيف الضغط الزائد في الغرفة.
عند إجراء الفصل الكروماتوغرافي الهابط ، يتم وضع وعاء للمرحلة المتحركة (القارب) في الجزء العلوي من الحجرة. يجب أن يحتوي القارب على حجم من الطور المتحرك يكفي لتنفيذ مرحلة واحدة على الأقل
اللوني المتعدد. يجب أن يتجاوز طول القارب العرض
حسنًا ، ورقة من الورق الكروماتوغرافي. يجب أن تكون الكاميرا مجهزة بـ
أجهزة لتثبيت ورقة الكروماتوغرافيا في العمل
الموقف والدخول في المرحلة المتحركة في القارب.
عند تنفيذ اللوني التصاعدي ، يتم وضع الطور المتحرك
إما أن تصب في قارب مثبت في أسفل الحجرة ، أو تصب
وصولا إلى قاع الغرفة.
الجدران الداخلية للغرفة مبطنة بورق الترشيح ، مما يساهم في تشبعها بشكل أسرع وأكثر اكتمالاً بأبخرة المذيبات.
lei المدرجة في تكوين المرحلة المتنقلة.
يتم تقديم إعداد المعدات والورق الكروماتوغرافي والمرحلة المتنقلة في دراسات.
1.2 كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة (42-0094-09)
العملية الكروماتوغرافية في طبقة رقيقة من مادة ماصة تترسب على ركيزة صلبة خاملة (زجاج ، معدن ، أو بوليمر-
nuyu) ، يسمى كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة أو اللوني في رقيقة
طبقة من المواد الماصة (TLC).
يمكن إجراء الفصل بعدة آليات: الامتزاز
زوج الأيونات ، التبادل الأيوني ، الاستبعاد-
nomu (اختراق بالهلام) أو حلزوني أو أي مزيج منهما.
نتيجة لحركة التحليلة والخطيرة تحت تأثير
عن طريق القوى الشعرية ، يتم فصل خليط المواد المدروسة إلى مكوناته. عند فصل المواد تتشكل على سطح سور-
بقع أو خطوط دائرية أو بيضاوية منحنية (مناطق كروماتوغرافية).
تتميز تنقل المادة أثناء الفصل بالقيمة R f
و R s (انظر GPM "اللوني" ، المعادلة 6 والشكل 1.4).
تُستخدم المعلمات R f و R s لتحديد المواد ولتقييم قوة الفصل للنظام.
اختبار المصادقة (تحديد) تحليل خمسة
يتم إجراء المواد باستخدام كروماتوغرافيا متزامنة لنفس كمية المادة التحليلية والعينة القياسية على نفس مخطط الكروماتوغرام. علاوة على ذلك ، إذا كانت المواد متطابقة ، فإن المناطق الكروماتوغرافية المقابلة لها لها نفس الشكل ، تزداد الكثافة
الامتصاص أو التلوين والقيم المتساوية لـ R f.
عند اختباره من أجل النقاءيجب أن تحتوي المادة والشوائب الرئيسية في ظروف الكروماتوغرافيا على قيم مختلفة لـ R f. في الوقت نفسه ، من الممكن الحكم على درجة نقاء المادة التي تم تحليلها من خلال الحجم والشدة
بقع الشوائب المكتشفة على الكروماتوجرام. يمكن تحديد محتواها بشكل شبه كمي. للقيام بذلك ، يتم تطبيق كميات معينة من التحليل والشهود على اللوحة. لتحديد
تقسيم الشوائب التي تم تحديدها حيث يستخدم الشهود عينات قياسية من الشوائب المحددة بكميات مقابلة
بما يتوافق مع محتواها المحدود. لتحديد مجهول
من الشوائب ، غالبًا ما يتم استخدام الحلول المرجعية
مخفف بتخفيف محلول الاختبار ، كما هو محدد في الصيدلية الخاصة
مقالة makopey. يقدر محتوى الشوائب في المادة المحللة
تُحسب بمقارنة منطقة الشوائب من حيث مجمل الحجم والشدة مع النقاط المقابلة للشاهد.
الكمياتيتم تنفيذ المواد الموجودة على الكروماتوجرام ،
عادة كثافته.
الأجهزة والمواد الأساسية:
– لوحات ذات طبقة ثابتة من المواد الماصة من التعديلات المختلفة ؛
– غرف كروماتوغرافية
– معايرة الشعيرات الدموية والحقن المجهرية ؛
– أجهزة لتطبيق كروماتوجرامس للكشف عن الكواشف -
البضائع (مرشات للرش ، غرف غمر الكرومو-
المخططات في الحل ، وما إلى ذلك) ؛
– معايير المواد ،المذيبات والكواشف للكشف عن الكروم
مناطق رسومية؛
ultrachemiscopes مع مصابيح الأشعة فوق البنفسجية عند 254 نانومتر و 365 نانومتر.
يجب أن يجتاز المصباح المستخدم الاختبار التالي.
تحقق من تشغيل المصباح.ضع 5 ميكرولتر من هلام السيليكا G على الطبق.
0.04٪ محلول ساليسيلات الصوديوم في الكحول 96٪ للمصابيح ذات الحد الأقصى و z-
التشعيع عند 254 نانومتر أو 5 ميكرولتر من محلول 0.2٪ من ساليسيلات الصوديوم في الكحول
96٪ للمصابيح ذات الانبعاث الأقصى 365 نانومتر على شكل بقعة بقطر حوالي 5 مم ؛ يجب أن تتوهج البقعة.
عند إجراء التحليلات ، المسافة بين المصباح والكروماتوغرافيا
يجب ألا تتجاوز اللوحة المسافة المستخدمة عند فحص تشغيل المصباح.
ملحوظة. يجب أن يكون الكحول المستخدم خاليًا من المواد الفلورية.
لوحات الكروماتوغرافيا
لوحة TLC عبارة عن ركيزة صلبة (زجاجية-
نيو أو معدن أو بوليمر) بطبقة مترسبة من مادة ماصة. تول-
سمك الطبقة الماصة من 0.1 إلى 0.25 مم للنسخة التحليلية ومن 0.5
حتى 2.0 مم للتحضير.
قد تحتوي الصفائح الكروماتوغرافية النهائية على الفلورسين
مؤشر للكشف عن امتصاص المواد في الأشعة فوق البنفسجية-
المناطق الطيفية عند 254 و 365 نانومتر.
الحجم الحبيبي للمادة الماصة للنسخة التحليلية من TLC هو
5-20 ميكرومتر. إلى جانب هذه اللوحات ، يمكنك استخدام كفاءة عالية
صفائح كروماتوجرافية نشطة تحتوي على مادة ماصة ذات جسيمات حجمها 5-7 ميكرومتر. هذه اللوحات تجعل من الممكن زيادة كفاءة الفصل وتقليل حد الكشف عن مناطق الكروماتوغرافيا.
يتم أيضًا إنتاج لوحات ذات مواد ماصة وألواح متجانسة.
كي مع منطقة تركيز (ألواح ثنائية الطور). الاستخدام الأخير
تستخدم في التحليل الصيدلاني لفصل الخلائط المعقدة وغير المتجانسة (مقتطفات من المواد الخام الطبية العشبية ، ومحاليل الأقراص
الحالية مع المكونات المساعدة ، وأشكال الجرعات اللينة ، مختلطة
غرف الكروماتوغرافيا
استخدم الغرف الكروماتوغرافية للعمودية أو الأفقية
شطف مظلة بأغطية مختومة. الكاميرات الأفقية
تم تجهيز تل شطف أيضًا بأجهزة لتزويد eluent للصفيحة. قبل التحليل ، عادة ما تكون الجدران الداخلية للغرفة مبطنة بورق ترشيح مبلل بالطور المتحرك. للشطف العمودي ، يتم استخدام غرف مع حاجز في وسط القاع.
يسمح استخدام غرفة للشطف الأفقي بالشطف المتزامن من جوانب متقابلة من اللوحة.
stinki ، مما يضاعف أداء التحليل مقارنةً بـ
نيي باستخدام غرفة للشطف الرأسي. يؤدي هذا أيضًا إلى تقليل استهلاك المرحلة المتنقلة بحوالي 10 مرات. في ال-
في غرفة أفقية ، تحدث حركة الطور المتحرك على طول الصفيحة فقط بسبب القوى الشعرية ، ولا توجد مساهمة من الجاذبية ، مما يزيد من كفاءة الفصل مقارنة بالغرف في الوضع الرأسي
شطف كال.
مراحل المحمول (MF)
يفضل أن تكون الأطوار المتحركة (eluents) ذات تيار منخفض
إما مع المادة الماصة (NF ، المرحلة الثابتة) ، أو مع مكونات الفصل
خلطاتي. يجب أيضًا أن يتبخر PF بسرعة من سطح الكروماتوجرام بعد الشطف.
لقمع تفكك الجزيئات القطبية للمكونات ، الفصل
من الخليط الذي يتم خلطه ، تضاف المواد الحمضية أو الأساسية إلى PF
(الصفات التعريفية).
تطبيق العينة
إذا تم الإشارة إلى ذلك في دراسات خاصة ، فإن اللوحات تكون أولية
تغسل جيدًا بالمذيب وتنشط بالتسخين لمدة ساعة واحدة
عند 100-105 درجة مئوية في الفرن. يجب تخزين الألواح في مجفف محكم الغلق قبل أخذ العينات. تطبيق العينات
نكون:
– معايرة الشعيرات الدموية بنهاية حادة ؛
– مكبس microsyringes مع نهاية حادة من الإبرة ؛
– أدوات تطبيق شبه أوتوماتيكية أو أوتوماتيكية.
يتم التطبيق بطريقتين: على شكل بقع (2-5 مم قطر-
متر) مع فواصل بين البقع لا تقل عن 10 مم وعلى شكل شرائط بطول
نوح من 10 إلى 20 مم مع وجود فجوة بينهما لا تقل عن 10 مم. يجب ألا تقل مسافة خط البداية من الحافة السفلية للوحة عن 10 مم.
من أجل تجنب "آثار الحافة" من تلطيخ جبهة PF أثناء الشطف
قبل تطبيق العينات ، اكشط جانبي اللوحة
طبقة ماصة بعرض 2-3 مم. يجب أن تكون المسافات على خط البداية من الحواف الجانبية للوحة إلى الأماكن التي تم فيها تطبيق العينات الأولى والأخيرة
يجب أن تكون 10 مم على الأقل. في عملية تطبيق العينات ، من غير المقبول
تلف المادة الماصة عند خط البداية. تجفيف العينات المطبقة جافة
تعمل في تيار من الهواء البارد أو الدافئ ، أو على طاولة خاصة بها تدفئة كهربائية.
طرق الشطف
يتم استخدام طرق الشطف التالية: الشطف التصاعدي
(أحادية ومتعددة ، أحادية البعد وثنائية الأبعاد - مع دوران
نتن 90 أو 180) وأفقي.
ارتفاع اللوني
ما لم ينص على خلاف ذلك في دراسة خاصة ، يتم وضع اللوحة مع العينات المطبقة عموديًا في الغرفة ، بشكل أولي
مشبع ببخار PF لمدة ساعة واحدة عند 20-25 درجة مئوية. يجب أن يكون مستوى PF موجودًا أسفل خط البداية. الغرفة مغلقة ويتم تنفيذ العملية في
20-25 مئوية في مكان محمي من الضوء. بعد المرور عبر جبهة PF ،
واقفًا ، موضحًا في دراسة ، تتم إزالة الصفيحة من الغرفة وتجفيفها وتطويرها وفقًا للشروط المحددة.
عند إجراء كروماتوغرافيا ثنائية الأبعاد ، تُجفف اللوحة بعد الفصل الكروماتوجرافي في الاتجاه الأول ويتم الفصل الكروماتوجرافي في اتجاه عمودي على الأول.
اللوني الأفقي
يتم وضع اللوحة مع العينات المطبقة في الحجرة وتوجيهها على طول
تدفق PF من الدرج إلى الغرفة وفقًا لتعليمات الجهاز للشطف الأفقي. يتم تنفيذ العملية عند درجة حرارة 20-25 مئوية (إذا تم الإشارة إليها في مكان خاص-
مقالة Makopei ، في وقت واحد من جوانب متقابلة من اللوحة). شارك-
عندما يجتاز PF المسافة المشار إليها في الدراسة الخاصة ،
يتم إخراج الرائحة الكريهة وتجفيفها وتطويرها وفقًا للشروط المحددة.
يتم إجراء كروماتوغرافيا ثنائية الأبعاد كما هو موضح في قسم "الارتفاع-
تشغيل اللوني ".
طرق الكشف
كشف (كشف) المناطق الكروماتوجرافية بعد الاختبار
يتم إجراء قياسات TLC النوعية وشبه الكمية بالطرق التالية:
- المراقبة تحت ضوء الأشعة فوق البنفسجية ؛
– الرش بمحلول الكشف عن الكواشف ؛
– حفظ الكاشف في أزواج ؛
– الغمر في محاليل الكشف عن الكواشف في غرف خاصة.
كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة عالية الأداء (HPTLC)
تزداد كفاءة الفصل بسبب الزيادة في مساحة الفصل بين المرحلتين المتنقلة والثابتة بسبب انخفاض في القطر
متر من الجسيمات الماصة ، وبسبب التوحيد الأكبر لحجم هذه الجسيمات. يتم استخدام ألواح HPTLC ، كالمعتاد
متغير الطور (NF القطبي) والطور المعكوس (NF غير القطبي)
مقارنةً بـ TLC الكلاسيكي ، يسمح استخدام الألواح عالية الأداء بما يلي:
– زيادة عدد العينات التي تم تحليلها عن طريق تقليل قطر نقاط البداية (حتى 1-2 مم) أو أطوال الشريط (حتى 5-10 مم) ؛
– تقليل الفجوات بين نقاط البداية (حتى 5 مم) ؛
– لتقليل وقت الفصل اللوني عن طريق تقليل نطاق الجزء الأمامي من الطور المتحرك (PF) ؛
– تقليل استهلاك (حجم) PF ؛
- تقليل حدود الكشف عن البقع والتحديد الكمي للمواد التحليلية بنسبة 10-100 مرة.
يوفر استخدام HPTLC نقاطًا أكثر إحكاما للمركبات المنفصلة ، مما يحسن الخصائص المترولوجية لـ
التحديد النوعي باستخدام المسح اللوني.
كروماتوغرافيا الورق (الكمبيوتر)
لأول مرة ، تم استخدام كروماتوغرافيا الورق لفصل وتحديد الأحماض الأمينية في عام 1943. اعتمادًا على طبيعة عملية الفصل ، يتم تصنيف BC عادةً على أنها توزيع ، وامتصاص ، وتبادل أيوني. تقنية BH
(بالإضافة إلى كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة) بسيطة وسريعة ، مما يفسر ، بالاقتران مع الكميات الدقيقة المطلوبة من التحليلات ، الاستخدام الواسع لهذه الطريقة.
عند الفصل الكروماتوغرافي على الورق ، يحدث فصل المواد التي تم تحليلها نتيجة لأفعال الامتزاز المتعددة على السليلوز من الورق (أو الامتصاص في الماء الذي يشرب الورق) - في المرحلة الثابتة وأعمال الامتصاص في محلول الشطف - في المرحلة المتنقلة. يجب أن يكون الورق متجانسًا في الكثافة وأن يكون محايدًا كيميائيًا وامتصاصًا. تنتج الصناعة الروسية حاليًا أربع درجات من الورق الكروماتوغرافي رقم 1 ، 2 ، 3 ، 4. يختلف كل رقم في الكثافة ، وبالتالي في سرعة المذيب. الورقة رقم 1 و 2 تسمى "سريعة" والورقة رقم 3 و 4 تسمى "بطيئة". كما أنها تنتج درجات خاصة من الورق تحتوي على نسبة عالية من مجموعات الكربوكسيل (لفصل الكاتيونات) ، وكذلك الأوراق التي تحتوي على مبادلات أيونية أو مواد ماصة أخرى.
هذه العملية تسير على النحو التالي. يتم وضع قطرة من محلول يحتوي على خليط من المواد على شريط من الورق الكروماتوغرافي ويترك ليجف. بعد ذلك ، يتم إنزال أحد طرفي الورق في وعاء به مذيب مناسب ويتم إغلاقه بإحكام.
المذيب ، الذي يتحرك تحت تأثير القوى الشعرية على طول شريط من الورق ، يلتقط مكونات الخليط الذي تم تحليله. نتيجة لعمليات الامتصاص والامتصاص ، يتم فصل الخليط إلى مكونات فردية. بالإضافة إلى كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة ، تعتمد جودة الفصل على قيمة معاملات التوزيع للمكونات - ص / ،توصيف السرعة النسبية لحركتها على الورق. لفصل عالي الجودة على الورق ، القيم ص /يجب أن تكون المكونات في حدود 0.05-0.85.
تشبه تقنية إجراء التحليل على الورق الكروماتوغرافي تقنية الفصل اللوني للطبقة الرقيقة. هناك عدة متغيرات منه: أحادي البعد ، ثنائي الأبعاد ، دائري وكهربائي. كما هو الحال في كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة ، تتضمن طريقة الفصل اللوني أحادي الأبعاد وثنائي الأبعاد تدفقات مذيب تصاعديًا أو تنازليًا.
يعد اختيار مذيب مناسب مهمة صعبة إلى حد ما. يجب ألا يختلف هذا المكون ، بالإضافة إلى المواد التي تم تحليلها ، بشكل حاد في خصائص القطبية والماء ، وإلا فإنها إما ستبقى عند خط البداية أو ستتحرك جنبًا إلى جنب مع مقدمة المذيب. إذا بقيت مادة النظام قيد الدراسة على خط البداية ، فهذا يشير إلى قابلية ذوبانه المنخفضة في الطور المتحرك ؛ وفي هذه الحالة ، يجب استخدام مذيب أكثر قطبية. على العكس من ذلك ، إذا تحركت المادة مع جبهة المذيب (/؟ / = 1) ، فهذا يعني أنها تتفاعل بشكل ضعيف مع المرحلة الثابتة ، وينبغي اختيار مذيب أقل قطبية للتحليل. بالنسبة للمواد المحبة للماء بقوة ، يتم استخدام الخلائط التي تحتوي على نسبة عالية من الماء ، على سبيل المثال ، البيوتانول الثانوي المشبع بالماء ، المرحلة العليا من خليط من ن-بيوتانول وحمض الخليك والماء (4: 1: 5) ، الأيزوبروبانول والأمونيا نظام ، حمض الخليك 15٪ ، إلخ.
يتم استخلاص المواد ذات الألفة المتوسطة للماء ، والتي يتم استخلاصها من الماء باستخدام أسيتات الإيثيل ولكن ليس مع البنزين ، باستخدام مذيبات ذات قطبية متوسطة ، مثل أسيتات البيوتيل أو الكلوروفورم ، مع إضافات صغيرة من المواد القطبية أو الماء.
لفصل المواد غير القابلة للذوبان عمليًا في الماء ، عادةً ما يتم استخدام البنزين أو الهكسان الحلقي كعناصر شطف.
في بعض الأحيان ، لتقييم خصائص مواد الخليط الذي تم تحليله ، يتم تنفيذه كروماتوغرافيا أولية(عادة في نظام خلات البوتيل - الماء). اعتمادا على القيم المحددة بهذه الطريقة ص /من التحليلات ، يتم بعد ذلك اختيار مزيج أكثر قطبية أو غير قطبية.
كما هو الحال في كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة ، لاكتشاف المكونات الفردية ، يتم معالجة الكروماتوجرام بكواشف مناسبة ، ينتج عن تفاعلها مع مكونات الخليط الذي تم تحليله مركبات ملونة. يتم إجراء القياس الكمي عن طريق المقارنة البصرية لشدة اللون أو التألق لبقع العينة والمعايير ، أو عن طريق قياس حجم البقعة ، بعد تحديد العلاقة مسبقًا بين كمية المادة وحجم البقعة الموجودة عليها. اللوني. من الممكن أيضًا استخراج المواد من البقع الكروماتوغرافية من خلال تحليلها الفيزيائي الكيميائي اللاحق.
يعتمد الفصل الكروماتوغرافي على خاصية المكونات المراد فصلها لتوزيعها بشكل مختلف بين مرحلتين سائلتين غير قابلين للامتزاج أو الامتزاج قليلاً. إحدى المراحل السائلة هي مرحلة ثابتة ، يتم تثبيتها بقوة على سطح مادة صلبة - "حاملة" - في شكل طبقة أحادية الجزيء من السائل. في المرحلة الأخرى - متحرك - يذوب خليط الاختبار المودع على المادة الحاملة.
في عملية الفصل اللوني ، يتم إعادة توزيع مواد الخليط بين مرحلتين سائلتين غير قابلين للامتزاج. تختلف سرعة حركة المكونات الفردية ، مما يجعل من الممكن فصلها عن خليط معقد. في الممارسة البحثية ، يتم استخدام طريقة الفصل اللوني على الورق على نطاق واسع.
كروماتوغرافيا التقسيم على ورق.الحامل عبارة عن ورق ترشيح يجف بالهواء ، والماء المسترطب الموجود فيه هو المرحلة الثابتة. تستخدم المذيبات العضوية غير القابلة للامتزاج بالماء أو التي تمتزج جزئيًا بالماء كمرحلة متحركة.
عند الحصول على اللوني باستخدام طريقة كروماتوغرافيا الورق ، يتم وضع قطرة من محلول الاختبار على حافة شريط ورق الترشيح ، ثم يتم غمر الشريط في حمام زجاجي مصمم خصيصًا للكروماتوغرافيا التي تحتوي على مذيب متنقل. عندما يتحرك المذيب عبر الورق ، تتحرك المكونات الفردية للخليط أيضًا ، ولكن بسرعات مختلفة ، مما يضمن فصل الخليط.
يتم الحصول على اللوني في غرف محكمة الغلق في جو مشبع بأبخرة مذيب عضوي وماء. يتم تجفيف المخططات اللونية الناتجة ، ومن أجل تطوير المواد المنفصلة ، يتم رشها (تطويرها) بكاشف يشكل مركبات ملونة بمواد معزولة ، مما يجعل من الممكن تحديد موقعها على شريط من الورق. في ظل ظروف تجريبية معينة ، يتميز توزيع المواد الفردية في كلتا المرحلتين السائلتين بمعامل ثابت Rf.
يتم تحديد معامل التوزيع Rf من خلال نسبة المسافة (بالسنتيمتر) التي يقطعها محلول الاختبار إلى المسافة (بالسنتيمتر) التي يقطعها المذيب. تعتمد قابلية استنساخ قيم الترددات اللاسلكية على ظروف البحث الذي يتم إجراؤه (جودة الورق ، درجة نقاء المذيبات ، درجة الحرارة ، تكوين الغلاف الجوي الغازي ، إلخ).
هناك عدة أنواع من كروماتوغرافيا الورق: تصاعدي - يتحرك المذيب من أسفل إلى أعلى ، وينزل - يتحرك المذيب من أعلى إلى أسفل وشعاعي (دائري) - يتحرك المذيب من المركز إلى الدائرة. بالإضافة إلى ذلك ، يتم استخدام اللوني أحادي البعد وثنائي الأبعاد ؛ في اللوني أحادي البعد ، يتم فصل المواد في اتجاه واحد ، ثنائي الأبعاد - في اتجاهين متعامدين بشكل متبادل.
كروماتوغرافيا أحادية البعد.اللوني أحادي البعد هو الأبسط ويستخدم لدراسة المخاليط البسيطة ، للتحقق من نقاء المادة ، للتعرف على المواد.
باستخدام اللوني أحادي البعد ، يكون إجراء التحديد على النحو التالي. يتم تطبيق كمية معينة من محلول الاختبار على شريط من الورق الكروماتوغرافي على مسافة عدة سنتيمترات من الحافة. يتم وضع الورق في حمام مذيب في الغرفة باستخدام اللوني المنبع أو المصب (الشكل 11). في هذه الحالة ، يتقدم المذيب ، وعندما يبقى حوالي 2 سم حتى النهاية ، تتوقف العملية ، ويتم إزالة مخطط الكروماتوغرام من الحجرة ، ويتم تمييز واجهة المذيب وتجفيفها عند درجة حرارة 100 درجة مئوية لإزالة المذيب.
تم تطوير مخطط الكروماتوجرام من خلال المعالجة بكاشف خاص ، ووفقًا لموقع البقع الملونة المتكونة على الكروماتوجرام ، يتم تحديد التردد الراديوي لمادة معينة ، مع مراعاة المسافة من نقطة البداية لتطبيق المحلول إلى منتصف المكان المقابل. بعد ذلك ، باستخدام جداول خاصة ، يمكنك تحديد المادة (على سبيل المثال ، أي حمض أميني) يتوافق مع البقعة. عادة ، يتم الحصول على مخطط كروماتوجرافي للمواد المعروفة في وقت واحد - يتم استخدام "الشهود" لتحديد المواد. عن طريق المصادفة موقع البقع من هذه كروماتوجرامس ، يتم تحديد هوية المواد.
كروماتوغرافيا ثنائية الأبعاد.يتم استخدام كروماتوغرافيا ثنائية الأبعاد لفصل الخلائط المعقدة ، على سبيل المثال ، لتوصيف الأحماض الأمينية التي تم الحصول عليها عن طريق التحلل المائي للبروتين. تتكون هذه الطريقة الكروماتوغرافية من حقيقة أن فصل المواد يتم على خطوتين ، باستخدام مذيلين في اتجاهات متعامدة بشكل متبادل.
كروماتوغرافيا شعاعية (دائرية).بالنسبة للكروماتوغرافيا الشعاعية ، يتم استخدام المرشحات الدائرية ، والتي يتم تقسيمها بقلم رصاص بسيط إلى عدد من القطاعات من نفس الحجم ويتم رسم دائرتين - واحدة على مسافة 1 - 1.5 سم من المركز والثانية على مسافة 5 سم على خط الدائرة الأولى (البداية) في كل قطاع يتم تطبيق قطرات من محلول الاختبار ، والدائرة الثانية هي حدود مخطط الكروماتوغرام. يتم عمل ثقب في وسط القرص الورقي ، يتم إدخال فتيل ورق مغمور في مذيب.
يرتفع المذيب على طول فتيل الورق ، ويمر إلى قرص الورق وينتشر عبر الورق ، وينقل المكونات في القطرة من المركز إلى المحيط. تُستخدم أطباق بتري ذات الجوانب العالية كغرف. اللوني الشعاعي هو أبسط وأسرع طريقة للفصل الكروماتوغرافي للمواد. بهذه الطريقة ، يتم تحقيق تأثير فصل عالي.
في التحليل الكمي بالكروماتوغرافيا الورقية ، يتم تطبيق حجم معين من محلول الاختبار على الورقة. إذا تم تحليل المحاليل ذات التركيز المنخفض للمواد قيد الدراسة ، فسيتم تطبيق القطرات عدة مرات ، في كل مرة يتم تجفيف البقعة المطبقة ، ثم يتم إجراء الفصل الكروماتوغرافي.
من أجل التحديد الكمي للمواد المعزولة ، يتم استخدام الطريقة التالية. من المخطط اللوني الذي تم الحصول عليه ، يتم قطع قسم يحتوي على المادة المعزولة ، ويتم التصفية التتابعية لها باستخدام مذيب ، ويتم تحديد تركيزها باستخدام مقياس ضوئي أو مقياس ضوئي ضوئي.
اللوني ورقة. من الكلمة الأولى ، تفهم أن هذا شيء متعلق بالورق ؛ والكلمة الثانية "كروماتوغرافيا" تعني "اللون" (الكروم) و "الكتابة" (الرسومات). قم بطيها وتحصل على "الكتابة بالألوان على الورق".
الكروماتوغرافيا الورقية هي أهم اختبار في العلم. عن طريق تحليل المكونات بعناية المواد الكيميائيةحسب اللون ، يمكن للعالم التعرف بسهولة على المواد الأولية. من السهل أن نرى أن اللوني ، الذي يستحق الدراسة حقًا ، يعمل بدقة من خلال التأثير الشعري - الطريقة التي ينتشر بها الماء في الورق.
العمود - يحتوي على مادة ماصة كروماتوغرافية ، تؤدي وظيفة فصل الخليط إلى مكونات فردية. Eluent - الطور المتحرك: غاز أو سائل أو (نادرًا) سائل فوق الحرج. المرحلة الثابتة - مرحلة صلبة أو سائلة مرتبطة بحامل خامل ، في كروماتوغرافيا الامتزاز - مادة ماصة. المخطط اللوني هو نتيجة تسجيل اعتماد تركيز المكونات عند مخرج العمود في الوقت المحدد. الكاشف - جهاز لتسجيل تركيز مكونات الخليط عند مخرج العمود. كروماتوغرافيا - جهاز كروماتوغرافيا.
طريقة الكروماتوغرافيا الهابطة التي يتحرك فيها الطور المتحرك نزولاً لأسفل.طريقة اللوني التصاعدي التي يتحرك فيها الطور المتحرك لأعلى طريقة كروماتوغرافيا أفقية يتحرك فيها الطور المتحرك أفقيًا. يستمر تقدم الطور المتحرك حتى بعد أن تصل المقدمة إلى نهاية الورقة إعادة الكروماتوغرافيا وهي طريقة يتم فيها تجفيف مخطط الكروماتوغرافيا وتكرار الكروماتوغرافيا (أحيانًا عدة مرات) بعد اكتمال المرحلة الأولى من الحركة. للكشف عن المواد على ورق كروماتوجراف كروماتوجرافي الناقل
المرحلة الثابتة (الثابتة) ثابتة على المرحلة الحاملة المتنقلة (المتنقلة) تضمن حركة المواد المراد فصلها على الحامل بمرحلة ثابتة مكان البدء حيث يتم تطبيق عينة الاختبار
في كروماتوغرافيا الورق ، يتم استخدام درجات خاصة من الورق ، تختلف في الأرقام ، مع زيادة كثافة الورق. الورق يحمل الماء في المسام ، وهي المرحلة السائلة الثابتة. يتم تطبيق محلول العينة على شكل قطرات على ورقة على مسافة ما من الحافة. بعد تبخر المذيب ، توضع حافة الصفيحة في غرفة محكمة الغلق تحتوي على مطور - مرحلة سائلة متحركة (على سبيل المثال ، الكحوليات ، والكيتونات ، والفينولات ، ورابع كلوريد الكربون ، والكلوروفورم ، ومخاليط أخرى منها ، وكذلك الخلائط مع المواد غير العضوية. المذيبات). في هذه الحالة ، تتحرك البقعة الأولية على طول تيار المطور ويتم فصل الخليط إلى مكونات. إذا لم يتم تلوين المواد ، فسيتم تطوير مخطط الكروماتوغرام ، على سبيل المثال ، عن طريق الرش بمحلول مؤشر ، يتم فحصه في الأشعة فوق البنفسجية ، وما إلى ذلك. نسبة المسافة Rf التي قطعتها النقطة I إلى المسافة التي قطعتها مقدمة المطور م ، في ظل نفس الظروف التجريبية ، هي قيمة ثابتة ؛ تختلف Rf للمواد المختلفة في القيمة ويمكن استخدامها لتحديد المركبات.
التصنيف الكروماتوغرافيا الورقية ، وكذلك اللوني بشكل عام ، يمكن تقسيمها إلى امتزاز توزيع عادي (يتم استخدام الطريقة لفصل المواد المحبة للدهون.) التبادل الأيوني التحليلي التحليلي ذو الطور العكسي
يتم إجراء التحديدات الكمية للمواد المختلفة في بقع الكروماتوجرام بواسطة الطرق التحليلية التقليدية. هناك: كروماتوجرام أحادي البعد ، ثنائي الأبعاد ، دائري ، عمودي وكهربائي.
1. يعتمد كروماتوغرافيا الامتزاز على الامتزاز الانتقائي للمكونات الفردية للخليط الذي تم تحليله بواسطة الممتزات المقابلة. عند العمل بهذه الطريقة ، يتم تمرير المحلول الذي تم تحليله عبر عمود مملوء بحبيبات الامتصاص الدقيقة. يستخدم كروماتوغرافيا الامتزاز لفصل الأبخرة والغازات غير المنحل بالكهرباء. ثانيًا. يعتمد كروماتوغرافيا التقسيم على استخدام الفرق في معاملات الامتصاص للمكونات الفردية للخليط الذي تم تحليله بين سائلين غير قابلين للامتزاج. يوجد أحد السوائل (الثابتة) في مسام المادة المسامية (الناقل) ، والثاني (المتحرك) هو مذيب آخر لا يختلط مع الأول.
يتم تمرير هذا المذيب عبر العمود بسرعة منخفضة. توفر القيم المختلفة لمعاملات التوزيع سرعة مختلفة للحركة وفصل مكونات الخليط. معامل توزيع مادة بين مذيبين غير قابلين للامتزاج هو نسبة تركيز مادة في مذيب متنقل إلى تركيز نفس المادة في مذيب غير متحرك:
في بعض الأحيان ، بدلاً من العمود ، يتم استخدام شرائح أو أوراق من ورق الترشيح التي لا تحتوي على شوائب معدنية كناقل لمذيب غير متحرك. في هذه الحالة ، يتم وضع قطرة من محلول الاختبار على حافة شريط ورق معلق فيه غرفة مغلقة، خفض حافتها بقطرة من محلول الاختبار المطبق عليها في الوعاء باستخدام مذيب متحرك (محرك) ، والذي يتحرك على طول الورقة ، ويبللها. في هذه الحالة ، تتحرك كل مادة واردة في الخليط الذي تم تحليله مع سرعتها الكامنة في نفس اتجاه المحرك.
نوع خاص من اللوني التقسيمي هو كروماتوغرافيا الغاز والسائل (GLC). تستخدم السوائل غير المتطايرة المختلفة المدعومة على مادة حاملة صلبة خاملة كمرحلة ثابتة ؛ كطور متحرك ، نيتروجين غازي ، هيدروجين ، هيليوم ، ثاني أكسيد الكربون ، إلخ. يتم فصل المخاليط بطريقة GLC في أعمدة ، وهي عبارة عن أنابيب بقطر داخلي يبلغ 16 مم وطول 15 مترًا ، مملوءة بـ مادة حاملة خاملة ، على سبيل المثال ، دياتومايت ، مشربة بسائل غير متطاير ، أو شعيرات دموية من الفولاذ والزجاج بقطر 0.2 0.3 مم وطول 25100 متر مع مرحلة سائلة تترسب على جدران هذه الشعيرات الدموية (غاز شعري -اللوني السائل).
. يعتمد كروماتوغرافيا التبادل الأيوني على استخدام عمليات التبادل الأيوني التي تحدث بين أيونات الممتزات المتنقلة وأيونات الإلكتروليت عندما يتم تمرير محلول من التحليل عبر عمود مملوء بمادة التبادل الأيوني (المبادل الأيوني). المبادلات الأيونية عبارة عن مركبات عضوية غير عضوية وعضوية ذات وزن جزيئي عالي غير قابلة للذوبان تحتوي على مجموعات نشطة (أيونية). الأيونات المتنقلة لهذه المجموعات قادرة ، عند ملامستها لمحاليل الإلكتروليت ، على تبادل الكاتيونات أو الأنيونات من المذاب. كمبادلات أيونية ، يتم استخدام أكسيد الألومنيوم (للكروماتوغرافيا) ، والبرموتين ، والفحم المسلفن ومختلف مواد التبادل الأيوني ، وراتنجات التبادل الأيوني. تنقسم المبادلات الأيونية إلى مبادلات كاتيونية قادرة على التبادل الكاتيوني (تحتوي على مجموعات نشطة: SO 3 H ، COOH ، OH) ؛ مبادلات الأنيون القادرة على تبادل الأنيون (المجموعات النشطة: NH 2 ، = NH) ؛ الأمفولات هي مواد تبادل أيوني ذات خصائص مذبذبة.
رابعا. يعتمد الفصل الكروماتوغرافي الرسوبي على قابلية الذوبان المختلفة للرواسب المتكونة من مكونات مختلفة من الخليط الذي تم تحليله مع كواشف خاصة مطبقة على مادة شديدة التشتت. يتم تمرير المحاليل التي تم تحليلها من خلال عمود مملوء بمادة مسامية (حاملة). يتم تشريب المادة الحاملة بكاشف ترسيب ، والذي يشكل رواسب مع أيونات المحلول ، والتي لها قابلية ذوبان مختلفة. يتم ترتيب الرواسب الناتجة ، اعتمادًا على قابلية الذوبان ، في تسلسل معين على طول ارتفاع العمود.
V. يعتمد الفصل الكروماتوغرافي لاستبعاد الحجم (المنخل الجزيئي) على النفاذية المختلفة لجزيئات المكونات إلى الطور الثابت (هلام غير أيوني مسامي للغاية). ينقسم كروماتوغرافيا استبعاد الحجم إلى كروماتوغرافيا نفاذية هلامية (GPC) ، حيث يكون eluent عبارة عن مذيب غير مائي ، وترشيح هلامي ، حيث يكون eluent عبارة عن ماء.
عند وضع قطرة من مزيج من الحبر الأحمر والأزرق في منتصف ورقة من ورق الترشيح المبلل وإسقاط الماء النظيف بعناية ، ستحصل قريبًا على نفس الصورة تمامًا. يوجد أدناه مخطط كروماتوجرافي حلقي على ورق لمزيج معقد من ستة أحماض أمينية مختلفة ،
تم تطويره بواسطة أربعة كواشف مختلفة. أعلى اليمين عبارة عن مخطط كروماتوجرافي ثنائي الأبعاد لمزيج أكثر تعقيدًا من أربعة عشر حمضًا أمينيًا مختلفًا. تم الحصول على هذا المخطط اللوني من نقطة واحدة من محلول خليط من الأحماض المطبقة على النقطة التي تشير إليها الدائرة. تم تنفيذ التطوير بالتناوب في اتجاهين باستخدام كواشف مختلفة. كل بقعة تسمية تنتمي إلى حمض أميني واحد. من خلال لون وموضع البقعة ، يمكن للمرء أن يحدد بدقة طبيعة المادة. أعلى اليسار - مخطط كروماتوجرام لطخة حبر عادية على ورق نشاف.
تطوير المخططات اللونية يتم تنفيذ تطوير المكونات على مخطط الكروماتوجرام بإحدى الطرق الواردة أدناه. الطرق الفيزيائية (بصريًا ، في ضوء النهار ، يتم تحديد موضع بقع المواد الملونة على مخطط الكروماتوجرام. في وجود مواد الفلورسنت ، يتم التطوير في ضوء الأشعة فوق البنفسجية.) الطرق الكيميائية (تم تطوير مخططات الكروماتوجرام مع المطورين السائل والغازي تفاعل المركبات الموجودة على مخطط الكروماتوجرام مع كاشف مطور مناسب لتشكيل مادة ملونة أو فلورية (يتم تطبيق مطورين سائل مع زجاجة رذاذ أو كواشف ضبابية ، يتم استخدام المواد الغازية عن طريق وضع مخطط الكروماتوجرام في أبخرة مطور.)
يتم وضع المخطط اللوني أفقيًا على ورقة من ورق الترشيح أو يُترك معلقًا على قضيب زجاجي ويتم رشه كقطرات صغيرة (ضباب) للمطور على كامل منطقة الكروماتوجرام ، أولاً من جانب واحد ثم من الجانب الآخر. عند التطوير باستخدام مطور غازي ، يتم تعليق مخطط الكروماتوجرام في غرفة يتم فيها وضع كاشف متطاير (على سبيل المثال ، بلورات اليود) ، أو في الجزء السفلي منها يتم الحصول على المطور كيميائيًا (على سبيل المثال ، يتم الحصول على أكاسيد النيتروجين عن طريق إضافة نتريت الصوديوم الصلب إلى محلول حمض الهيدروكلوريك).
طرق بيولوجية تم تطوير كروماتوجرامس باستخدام النشاط البيولوجي للمواد التي يجري الكروماتوجراف. التقييم النوعي للكروماتوجرام هو تحديد موضع البقعة أو النطاق الذي يتميز بقيمة R f = a / b ، حيث a هي المسافة من مركز بقعة العينة إلى خط البداية ، مم ؛ ب هي المسافة من مقدمة المذيب إلى خط البداية ، مم ، أو بقيمة Rx: Rx = a / c ، حيث c هي المسافة من مركز بقعة المادة المرجعية إلى خط البداية ، مم.
يتم تحديد كمية المكون المطلوب في العينة من خلال مقارنة حجم وكثافة لون بقعةها مع نقاط المادة المرجعية المطبقة على الورق في نطاق التركيز المحدد في الوثائق التنظيمية والفنية لكاشف الاختبار ومعالجتها في ظل ظروف الاختبار. يتم التقييم بصريًا أو بمساعدة جهاز (على سبيل المثال ، مقياس كثافة ، جهاز لمسح بقع المكونات على الورق) ، أو عن طريق شطف البقع وتحديد قياس ضوئي لاحق للكثافة البصرية للحلول. يتم تخزين مخططات الكروماتوجرام في ظل ظروف تمنع ظهور المطبوعات المتبادلة للكروماتوجرام (على سبيل المثال ، مع وسادات ورق الترشيح). إذا سمحت طبيعة البقع ، يتم تطبيق طبقة من الورنيش سريع الجفاف على المخططات اللونية. إذا لزم الأمر ، ارسم محيط الكروماتوجرام أو الصورة.
أمثلة على معدات الكروماتوغرافيا الورقية وكيفية استخدامها غرفة الكروماتوغرافيا الصاعدة والهابطة 1. غرفة الكروماتوغرافيا الصاعدة والهابطة (الشكل 1) الشكل. 2. غرفة للاستشراب الأفقي (الشكل 2) (الشكل 2) حجرة واحدة ؛ 2 شعرية من قضبان الزجاج. 3 قضيب زجاجي للضغط على نهاية الكروماتوجرام ؛ 4 غطاء 5 كروماتوغرام 6 مذيب
تبا. 3. حجرة لكروماتوجرام دائري (طبقان بتري) (الشكل 3) فتيل ورقي واحد ؛ 2 ، 4 أطباق بتري ؛ 3 كروماتوغرام دائري 5 مذيب 4. طرق وضع الكروماتوجرام في اللوني التصاعدي (الشكل 4) 1 اللوني. 2 غرفة كروماتوغرافيا ؛ 3 مذيب
تبا. 5. طريقة إدخال مخطط كروماتوجرام ورقي في الأخدود 1 اللوني ؛ 2 بداية ؛ 3 قضيب زجاجي 4 عصا عازمة للضغط على الكروماتوجرام في الأخدود ؛ 5 أخدود
يتم الحصول على مخطط كروماتوجرام ثنائي الأبعاد عن طريق فصل نقاط كروماتوجرام أحادي البعد مع مطور آخر في اتجاه عمودي على الصف الأول من البقع. في مخطط كروماتوجرافي دائري ، بقعة موضوعة في وسط الورقة غير واضحة على طول دوائر متحدة المركز. في كروماتوغرافيا العمود الورقي ، يتم الفصل على أقراص ورقية يتم إدخالها بإحكام في عمود أسطواني. للحصول على مخطط كروماتوجرافي كهربائي ، يتم تشريب ورقة من الإلكتروليت ، مثبتة بين الأقطاب الكهربائية ، ويتم تطبيق الخليط الذي تم تحليله ، وتوصيل الأقطاب الكهربائية بمصدر تيار مباشر ، وفي نفس الوقت يتم تغذية مذيب متنقل على الورقة في الاتجاه العمودي على اتجاه خطوط التيار الكهربائي للقوة.
في هذه الطريقة ، يحدث فصل المكونات بسبب توزيعها غير المتكافئ بين المرحلتين السائلتين والسرعات المختلفة لحركة المواد تحت تأثير المجال الكهربائي. يستخدم كروماتوغرافيا الورق لفصل وتحليل المواد العضوية وغير العضوية في المواد الطبيعية والصناعية (على سبيل المثال ، تحديد الراتنجات في المنتجات البترولية ، والعناصر الأرضية النادرة في الصخور والمعادن).
لا غنى عن الأساليب الكروماتوغرافية في مراقبة جودة الأغذية. القيمة الغذائيةيتم تحديد المنتجات من خلال تحليل تكوين الأحماض الأمينية للبروتينات ، والتكوين الأيزومري للأحماض الدهنية والجليسيريدات في الدهون والكربوهيدرات والأحماض العضوية والفيتامينات. في السنوات الأخيرة ، تم إجراء العديد من هذه التحليلات باستخدام تحليل كروماتوجرافي سائل عالي الأداء. لتقييم سلامة المنتجات ، فإنها تكشف المكملات الغذائية(المواد الحافظة ، مضادات الأكسدة ، المحليات ، الأصباغ ، إلخ) ، تحديد نضارة المنتجات ، إنشاء المراحل الأولىالتلف ومدة الصلاحية المسموح بها.
يمكن أن تكشف طرق الكروماتوغرافيا عن ملوثات مثل مبيدات الآفات ، والنيتروزامين ، والسموم الفطرية (الأفلاتوكسين ، والأوكراتوكسين A ، والزيرالينون ، وما إلى ذلك) ، والمركبات العطرية متعددة النوى ، والأمينات الحيوية ، والنترات ، وما إلى ذلك في المنتجات الغذائية. كما يمكن تلوث المنتجات الغذائية بسبب الاختراق من المواد الضارة من مواد التعبئة والتغليف ، على وجه الخصوص ، كلوريد الفينيل ، والبنزين ، والملدنات ، إلخ. المنشطات والهرمونات وأنواع أخرى من المستحضرات الصيدلانية ، التي يعتبر تعاطيها نموذجيًا في تربية الحيوانات المكثفة ، يتم تحديدها في منتجات اللحوم. مجال منفصل لتطبيق كروماتوغرافيا الغاز هو تحليل تركيبة رائحة المنتجات الغذائية. تم العثور على الآلاف من المكونات المتطايرة ، منها بضع عشرات فقط تحدد طبيعة الرائحة ، والباقي يعطي رائحة ومذاق المنتج الفردي.
في السنوات الأخيرة ، ظهر اتجاه جديد - التحليل الانتقائي للمكونات الغذائية. من خلال نسبة الأيزومرات الضوئية للأحماض الأمينية وأحماض الهيدروكسي وبعض المركبات الأخرى ، يمكن تحديد ما إذا كان منتج معين طبيعيًا أو يحتوي على مواد مقلدة ومضافات اصطناعية. أظهر التحليل Enantiomeric أن المعالجة بالميكروويف للمنتجات الغذائية ، على عكس المعالجة الحرارية الشديدة ، لا تؤدي إلى تكسير الأحماض الأمينية. ومع ذلك ، فإن جميع منتجات الألبان التي تخضع لعمليات التخمير تحتوي على الكثير من (غير سام) D- ألانين وحمض الأسبارتيك ، وهي نفايات بكتيريا حمض اللاكتيك.
تسود ايزومرات الأحماض الدهنية رابطة الدول المستقلة في الدهون الطبيعية. لقد وجد مؤخرًا أن الأيزومرات العابرة تزيد من LDL وتقلل من مستويات البروتين الدهني عالي الكثافة في الدم ، مما قد يساهم في تطور تصلب الشرايين. أدى تطوير تقنية الفصل الكروماتوغرافي للغاز وتحليل جميع أيزومرات الأحماض الدهنية إلى إجبار الشركات المصنعة على تقليل محتوى الأيزومرات غير المشبعة للأحماض غير المشبعة في المارجرين بعدة مرات.
تم التعرف على العديد من الأمينات الحيوية النشطة غير المرغوب فيها من الناحية الفسيولوجية في بعض الجبن بواسطة كروماتوغرافيا الغاز وتم حظر هذه الأجبان. في اليابان ، يستخدم L-tryptophan في الأطعمة التي يتم الحصول عليها من خلال الهندسة الوراثية والتكنولوجيا الحيوية. وعندما تم اكتشاف مرض غير معروف من قبل لدى آلاف الأشخاص وتوفي العشرات من المرضى ، ثبت بالطرق الكروماتوجرافية أن هذه العواقب المأساوية كانت ناجمة عن وجود ملوثات سامة في التربتوفان (تم اكتشاف 60 شوائب). تخضع الخمور والكونياك والمنتجات الأخرى المحتوية على الكحول للتحليل الكروماتوغرافي للغاز.
عد الآن إلى الزبدة المزيفة مرة أخرى. يوجد مثل هذا النفط - "فلاح". يشبه الزيت. رائحته مثل الزبدة. لذيذ. بادئ ذي بدء ، تقرر التحقق من عدد الدهون الثلاثية التي يحتوي عليها. في الزيت الحقيقي ، تشكل الدهون الثلاثية حسب وزن جميع الدهون الغالبية. في المتوسط - 98٪. نحن نستخدم طريقة كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة للتحقق. نحن نستخدم ألواح Sorbfil. النظام الكروماتوغرافي هو أبسط - البنزين.
